Resumen

La muerte celular programada es una forma de defensa muy primitiva en los sistemas celulares. Los virus de Estomatitis Vesicular (VSV) e Influenza (Inf) son inductores de apoptosis a través de señales no conocidas totalmente, cuyo estudio puede aclarar los mecanismos de patogenia viral. En particular el virus Inf es particularmente citotóxico en células MDCK y humanas, mientras el virus VSV induce apoptosis y acción citopática en células Vero y Hela. En este trabajo se comparan distintas metodologías como tinción con cristal violeta (CV) para determinar el porcentaje de células que sobreviven a la infección, la medida de láctico deshidrogenasa (LDH) que determina el daño que se produce en la membrana celular, la tinción de Hoechst (H) para monitorear la aparición de cuerpos apoptóticos y la actividad de caspasa-3 como proteína efectora que actúa tardíamente en el proceso apoptótico. Si bien la degradación del núcleo se ve claramente cuando las células infectadas con ambos virus se tiñen con H, las densidades ópticas (DO) de elusión de CV indican más de 50 % de células sobrevivientes de la infección con el virus Inf. Para ambos virus este reactivo permite observar una relación no lineal de la apoptosis con la multiplicidad de infección, que se atribuye a la presencia de partículas interferentes. Por otra parte en las infecciones con el virus Inf los valores de LDH son equivalentes a la cinética de muerte celular, indicando una acción específica viral sobre las membranas: el mismo virus tiene altos valores de actividad de caspasa-3 (7,2 DO/mg de proteína) aun con baja multiplicidad de infección, duplicando los datos que se obtienen con VSV e indicando la posible actividad de otras caspasas en el proceso. Asimismo al ensayar la actividad antiapoptótica de un extracto vegetal sobre ambas inducciones, a traves de H, se encontro una marcada diferencia, indicadora de una señal o de moléculas efectoras distintas. Por lo tanto el análisis de los resultados de estas metodologías contribuye a diferenciar los pasos claves de cada tipo de apoptosis.

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2007-01-31   |   1,543 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 1 Núm.1. Abril 2002 Pags. Qviva 2002; 1(1)