Resumen

La electroforesis alcalina de células aisladas en gel de agarosa o “Ensayo Cometa”, es un procedimiento de elevada sensibilidad con el que se puede determinar la frecuencia de roturas de simple cadena y sitios modificados en el ADN de las células expuestas a la acción de un agente contaminante genotóxico. En este trabajo se evalúo la sensibilidad y reproducibilidad del ensayo en celomocitos de lombrices expuestas sobre papel a concentraciones de 2,4,6-trinitrotolueno (TNT) de 0, 0.2, 0.6, 1, y 3 mg/cm2. Como control positivo se empleó el H2O2 300mM. Por cada concentración, 5 lombrices adultas con un peso promedio de 300-600 mg fueron mantenidas por 8 horas en recipientes de vidrio recubiertos interiormente con papel de filtro humedecido. Posteriormente fueron colocadas en tubos de ensayo recubiertos en su interior con papel de filtro, impregnado con la solución de TNT en acetronitrilo. Las lombrices fueron expuestas por 24 horas en condiciones de luz, humedad y temperatura controladas. La viabilidad de los celomocitos obtenidos por extrusión en buffer con guayacol evaluada con Tripan Azul fue de 97%. 10 mL de fluido celómico recién extruído fueron disueltos en agarosa de bajo punto de fusión y extendidos sobre porta objetos para ser sometidos al Ensayo Cometa. Los resultados muestran una tendencia al aumento de la migración de ADN con el incremento de la dosis (p< 0.05), indicando un efecto genotóxico de la exposición a TNT en estas condiciones, y demuestra que el ensayo de lombrices en papel puede ser un método rápido y reproducible de evaluar los efectos de contaminantes terrestres sobre el ADN. Agradecimientos: A la Universidad de Buenos Aires, por el subsidio TX34/1998-2000.

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2007-01-31   |   2,782 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 1 Núm.1. Abril 2002 Pags. Qviva 2002; 1(1)