Resumen

La actividad de la Proteína Quinasa A (PKA) fue medida in situ en células permeabilizadas de Saccharomyces cerevisiae +/- cAMP agregado exógenamente. Se usaron cuatro cepas diferenciables en sus fenotipos dependientes de PKA, de acuerdo con la predicción genética. Los fenotipos medidos fueron: trehalosa, glucógeno, actividad de un promotor dependiente de PKA y supervivencia en fase estacionaria. La actividad “endogena” de PKA (medida in situ en ausencia de cAMP exógeno) mostró la mejor correlación con los fenotipos. Nosotros proponemos que es un buen parámetro para estimar la actividad de PKA in vivo. Para verificarlo, la actividad “endógena” de PKA fue seguida después de la adición de glucosa a células creciendo sobre una fuente de carbono no fermentable, una condición fisiológica conocida que produce un pico transiente de cAMP durante los cinco minutos después del agregado de glucosa. La actividad “endogena” de PKA mostró un pico transiente, siguiendo en el tiempo el pico de cAMP. Sorprendentemente, la actividad de PKA medida en presencia de 10 mM cAMP, también mostró un pico de actividad. Western blots de las subunidades R y C y sus correspondientes actividades, ensayadas en extractos crudos, mostraron niveles constantes de ambas subunidades durante los 15 minutos después de la adicion de glucosa. Estos resultados sugieren un estado diferente de activabilidad de PKA dentro de la célula a lo largo de la subida transiente de cAMP. Un resultado adicional es que la proporción relativa de especies fosforiladas de la subunidad catalítica de PKA (TPK1), ensayadas por movilidad diferencial en PAGE nativo, cambio durante el pico de cAMP de forma dependiente de la actividad de PKA.

Palabras clave:

2007-01-25   |   1,693 visitas   |   3 valoraciones

Vol. 2 Núm.1. Abril 2003 Pags. Qviva 2003; 2(1)