Completo

Introducción.

La resistencia a los antibióticos es un fenómeno de crucial importancia en el tratamiento de enfermedades causadas por microorganismos patógenos. La excesiva prescripción de antibióticos y la automedicación, hace difícil que se limite su uso, lo que ocasiona que el no atacar a las bacterias correctas, les da la oportunidad de hacerlas resistentes. Esta resistencia se considera multifactorial, algunos mecanismos se han atribuido a la transferencia de genes de resistencia, otros se pueden presentar de forma intrínseca o por mutaciones genéticas.1 El conocimiento de que las bacterias presentes en las infecciones endodónticas expresen genes que las hagan resistentes a las diferentes terapias antibióticas podría traducirse en una elección de planes de tratamiento más efectivos, menores recidivas, menor probabilidad de agudizaciones, así como no incrementar el uso injustificado de antibióticos sistémicos y sus respectivas consecuencias en el estado de salud general de los pacientes. 
 

Objetivo.

Detectar genes resistentes a betalactámicos en bacterias de exudados periapicales.

Material y métodos.

Se realizó un estudio transversal, descriptivo y prospectivo, incluyendo 19 pacientes con órganos dentarios con diagnóstico de absceso apical agudo basado en la presencia de dolor espontáneo, exacerbado a la masticación, e inflamación localizada o difusa, necrosis pulpar y detección radiográfica de ensanchamiento del ligamento periodontal y/o lesión periapical. Se excluyeron pacientes que hayan recibido terapia antibiótica 3 meses antes de la toma de muestra y con enfermedades sistémicas. Se tomó muestra de exudado purulento, previo consentimiento informado aprobado por el Comité de Ética e Investigación de la Facultad de Estomatología con la clave CEI-FE-023-018. Las muestras se colocaron en PBS almacenándolas a -20°C, para posteriormente realizar la extracción y purificación del ADN, mediante el WizardTM Genomic DNA Purification Kit. Posteriormente se verificó y cuantificó la presencia de ADN en un espectofotómetro NanoDropTM Se procedió a realizar la amplificación con los oligos para el gen 16S rRNA y para los genes de resistencia blaTEM y blaSHV, utilizando una mezcla maestra con buffer 5x, MgCl2 25 mM, oligo sentido y antisentido 10 uM c/u, ADN Taq Polimerasa 5u/uL, dDNTP´s 10 mM, muestra de ADN1 µl, utilizando las condiciones de ciclado para los diferentes genes que se muestran en tabla 1 y 2. Se utilizó el C1000 Touch Thermal Cycler de Bio-Rad TM. Se procedió a realizar la electroforesis en gel de agarosa al 2% a 85 V por 60 minutos mediante una fuente de poder PowerPacTM Basic Power Supply de Bio-Rad. La observación del gel se realizó en el fotodocumentador ENDUROTM Gel Documentation System.(Figura 1)

Resultados.

Se realizó la prueba la prueba exacta de Fischer con el programa estadístico SPSS versión 24, entre la presencia del gen blaTEM y las variables cualitativas en cuanto a los síntomas presentes en los pacientes, sin encontrar resultados estadísticamente significativos (p>0.05) (Tabla 3). En la detección de los genes de resistencia a antibióticos el gen blaTEM se encontró en el 81.3% de las muestras, el gen blaSHV no se presentó en ninguna muestra.

Discusión.

En el presente estudio la fase inicial consistió en una fase diagnóstica, de pacientes con sintomatología que indicaba un absceso alveolar agudo, los cuales eran sometidos a un examen clínico y radiográfico para determinar su estado; realizada la evaluación se detectó que el dolor a la percusión, palpación y masticación, se encontraron presentes en todos los pacientes, esto debido a la inflamación generada en los tejidos perirradiculares ante el ataque bacteriano y las defensas del huésped.2 La resistencia a antibióticos ha sido estudiada desde el siglo pasado, en una revisión sistemática evidencian que la búsqueda de genes de resistencia se ha ido reproduciendo en diferentes ambientes orales como son: saliva humana, líquido crevicular, placa dental, intraconducto, dorso de lengua así como abscesos, siendo la PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) el método más utilizado,3,4,5 la cual se utilizó en el presente estudio. Los genes de resistencia mayormente estudiados en el campo endodóntico corresponden a genes de resistencia a penicilinas (????-lactamasas), tetraciclinas y macrólidos.6 en el presente trabajo, se investigaron los primeros mencionados, debido a que en el área endodóntica, las penicilinas corresponden a los antibióticos de primera elección demostrando una eficacia clínica ideal.7 En un estudio reportan la presencia del gen blaTEM en un 17%-43% de las muestras, lo cual contrasta con lo detectado en el presente trabajo en donde se tuvo un mayor porcentaje (81.3%).8 La diferencia se adjudica a que la muestra fue intraconducto, sin embargo en otro trabajo reportan un 24% la presencia de este gen, en muestras tomadas con un protocolo similar al presente estudio.9 Estos datos coinciden también con otro reporte en donde detectaron en infecciones endodónticas primarias un 87.1% el gen de resistencia blaTEM. 10 En cuanto al gen de resistencia blaSHV, se ha encontrado hasta en un 80% en enterobacterias,11 las cuales forman parte esencial de la microbiota de los abscesos alveolares agudos; sin embargo en la presente investigación ninguna de las muestras fue positiva para este gen.

Conclusiones.

Se logró detectar con un alto porcentaje (81.3%) la presencia del gen de resistencia a antibióticos blaTEM en bacterias de exudados periapicales, sin embargo no se detectó el gen blaSHV.

Palabras clave: 16S rRNA genes de resistencia blaTEM blasSHV

2023-06-23   |   287 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 15 Núm.1. Septiembre 2020 Pags. 74-76 Rev Invest Cien Sal 2020; 15(Supl. 1)